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高效液相色譜柱是色譜分離的核心。一支合適，穩(wěn)定，高效的色譜柱對建立普適性強，重現(xiàn)性好的方法是不可少的。因色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說是柱效的下降。此時需要對色譜柱進行再生：(1)反相柱的再生，采用以甲醇:水=90:10(V/V),純甲醇，異丙醇，二氯甲烷等溶劑作流動相，順次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20~30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。(2)正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲...

高效液相色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學(xué)性質(zhì)包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇高效液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。2.如果樣品極性太強，或酸性太強;可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強陰離子對試劑...

高效液相色譜柱的鍵合基質(zhì)分為硅膠基質(zhì)、聚合物基質(zhì)等，其中硅膠基質(zhì)應(yīng)用較為廣泛，其特點主要包括以下3方面：(1)低pH值，硅膠鍵合鍵容易水解(pH8)。(2)在接近中性的條件時，硅醇基裸露，顯酸性，不適宜分離堿性化合物。(3)某些硅膠被一定金屬污染，這些金屬會引起峰的不對稱或拖尾，甚至化合物的死吸附。高效液相色譜柱的硅膠基質(zhì)可分為全多孔硅膠微粒、雜化硅膠顆粒和實心核硅膠顆粒。1、全多孔硅膠基質(zhì)：全多孔硅膠，以其全多孔的結(jié)構(gòu)特點具有很高的比表面積，故具有很高的柱效。其機械強度大的...

反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*泛的技術(shù)，主要是因為它適用于分析絕大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因為重復(fù)進樣時強保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能。經(jīng)過等度運行后的高效液相色譜柱，有時用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，其化學(xué)性質(zhì)參數(shù)包括以下幾個方面：1、硅膠基質(zhì)硅膠基質(zhì)是通用的基質(zhì)，強度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。2、聚合物基質(zhì)聚合物基質(zhì)多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強度較小，有機溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。3、載碳量載碳量是基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則...

離子色譜柱是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過采用強極性固定性，并且結(jié)合高比例有機相/低比例水相組成的流動相來實現(xiàn)這一目的。而這樣的流動相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。離子色譜柱的分離機制：分離機理在目前還存在著爭議，主要包括以下三個方面：(1)分配機理(2)離子交換(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗現(xiàn)象則表明HILIC色譜柱的保留機理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級效應(yīng)，很難將其區(qū)分開來。影響離子色譜柱保留的主要...

色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。樣品的前處理過程：(1)最好使用流動相溶解樣品。(2)使用預(yù)處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。(3)使用0.45μm或0.22μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。實際使用中，液相色譜柱有可能會失效，常見的原因有：1、色譜柱...